Study of exogenius acid phosphatase mutants of Saccharomyces cerevisiae

Abstract

Acid phosphatase activity was found in the cultural medium after growing of veast S. serevisiae on the peptone plus glucose (PEP), peptone plus glucose plus inorganic phosphate (PEPPho) and yeast extract plus peptone plus glucose (YEPD) medium. 1 4 mutants were isolated on PEPPho medium: 7 after UV irradiation of strain IG-P188 (a hisx lys A2) and 7 after irradiation of strain P4-2I9 (aad1-14 hisx lys A12). Allelism test show that all mutants studied are in one gene. Analysis of an isoenzyme composition of exogenious acid phosphatase of yeast S. cerevisiae show that on the PEP medium there are two isoenzymes (I and II). After growing of yeast cells on the PEPPho medium there is only I in the cultural medium. Regulation of synthesis of these two enzymes is discussed.

Начата работа по изучению кислой фосфатазы дрожжей Sacch. cerevisiae с целью создания новой мутационной системы. Обнаружено, что кислая фосфатаза выбрасывается в среду в процессе выращивания клеток, что значительно облегчает задачу очистки этого фермента. В работе использовали два типа сред: YEPД и ПЕПФо. При выращивании клеток дикого типа на среде УЕРД обнаружены два изофермента кислой фосфатазы при электрофорезе в полиакриламидном геле — фосфатаза I и фосфатаза II. Синтез фосфатазы II прекращается при добавлении в среду неорганического фосфата. В то же время фосфатаза I не чувствительна к 20-кратному величению содержания неорганического фосфора в среде. На среде ПЕПФо получено 14 мутантов по фосфатазе I. Все 14 мутаций локализуются в одном гене, сцепленном с геном lys A12 и находящимся предположительно в правом плече IX хромосомы. В настоящее время в лаборатории разрабатывается метод очистки фосфатазы I из среды ПЕПФо.