Effect of methyl-beta-cyclodextrin on cell migration

Abstract

Липидные рафты играют важную роль в различных биологических процессах. Они представляют собой специальные мембранные микродомены, которые обогащены холестерином и сфинголипидами и некоторыми сигнальными белками, например Src-семейством киназ. Нарушение целостности липидных рафтов приводит к изменению сигнальных процессов, которые принимают участие в миграции клеток. Целью данной работы было изучение влияния метил-бета-циклодекстрина на клеточную миграцию трансформированных мышиных эмбриональных фибробластов (клеточная линия 3T3B-SV40). Метил-бета-циклодекстрин использовали для разрушения липидных рафтов. Это химическое вещество извлекает холестерин из клеточной мембраны, в том числе из липидных рафтов, что вызывает нарушение целостности их структуры и разрушение. Два метода анализа клеточной миграции in vitro были использованы для измерения подвижности клеток: зарастание экспериментальной раны и миграция одиночных клеток. Результаты работы показали, что скорость миграции клеток, обработанных 5 мМ метил-бета-циклодекстрина, уменьшается по сравнению с контролем. Однако через 8 часов после начала эксперимента разница в скорости миграции начинает уменьшаться, что связано с поглощением клетками, которые были обработаны метил-бета-циклодекстрином, внеклеточного холестерина, который содержится в культуральной среде.Lipid rafts play an important role in various biological processes. They are special membrane microdomains, with rich in cholesterol and sphingolipids and some signal proteins, for example, Src family kinases (SFK). Disruption of the integrity of lipid rafts leads to a change in the signaling processes that take part in cell migration. The aim of this work was to study the effect of methyl-beta-cyclodextrin on the cell migration of transformed mouse embryonic fibroblasts (cell line 3T3B-SV40). Methyl-beta-cyclodextrin was used to destroy lipid rafts. This chemical substance extracts cholesterol from the cell membrane, including from lipid rafts, which causes their destruction. Two methods for analyzing cell migration in vitro were used to measure cell mobility: overgrowth of the experimental wound (wound healing assay) and single migration (single cell migration assay). The results of the work showed that the migration rate of cells treated with 5 mmol of methyl-beta-cyclodextrin decreases compared to the control. However, 8 hours after the start of the experiment, the difference in the migration rate begins to decrease, which is due to the absorption by the cells that have been treated with methyl-beta-cyclodextrin of extracellular cholesterol that is contained in the culture medium.