РЕЦЕНЗИЯ НА ДИССЕРТАЦИЮ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ МАГИСТРА Тема: «ГЕНОТИПИРОВАНИЕ ВИРУСОВ ГРИППА МЕТОДОМ АНАЛИЗА КРИВЫХ ПЛАВЛЕНИЯ ПРОДУКТОВ ПЦР ВЫСОКОГО РАЗРЕШЕНИЯ (НRM-АНАЛИЗ)» Соискатель: студентка 2 курса магистратуры кафедры микробиология Санкт-Петербургского государственного университета, Г.О. Ландграф. Дипломная работа Галины Олеговны, посвященная разработке методов молекулярно-генетического анализа реассортантных штаммов вируса гриппа для живой гриппозной вакцины, имеет классическую структуру. Во введении автор аргументировано доказывает актуальность и новизну выполненной работы. Литературный обзор включает 73 источника, большинство из которых иностранные, и достаточно полно описывает современные представления о роли получения кандидатных вакцинных штаммов для профилактики гриппа и предотвращения развития пандемий. Раздел «Материалы и методы» написан четко и грамотно, что свидетельствует о владении автором современными методами молекулярной биологии и вирусологии, которые соответствуют используемым в мировой практике в настоящее время. Глава характеризуется единым стилем, что говорит о владении автором описываемыми методами. Высокий уровень изменчивости вируса гриппа и широкий круг «хозяев» приводят к появлению новых вирусов гриппа, которые могут быть вирулентны не только для животных, но и для человека. В связи с этим разработка вакцин «резерва» против вируса гриппа птиц является актуальной проблемой. На промежуточных этапах подготовки вакцинного штамма, когда нужно быстро проанализировать значительное число реассортантов, возникает потребность в разработке быстрых и недорогих методов первичного скрининга. Для анализа структуры генома реассортантов вируса гриппа, полученных на основе донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57(Н2N2) усовершенствован современный метод ПЦР в реальном времени с анализом кривых плавления высокого разрешения (НRM-анализ) с использованием интеркалирующего флуоресцентного красителя нового поколения ЕvaGreen (BioRad). Разработанный метод применен автором для изучения структуры генома нового вакцинного кандидата - аттенуированного холодоадаптированного вируса гриппа подтипа А/Н6N1 для живой гриппозной вакцины. В ходе выполнения данной работы подтвержден состав реассортантного вакцинного кандидата Лен17/H6, который приобрел 6 генов, кодирующих внутренние и неструктурные белки от донора аттенуации Лен/17, а также изучены его биологические характеристики in vivo и in vitro, подтверждающие наличие свойств температурочувствительности, холодовой адаптации и аттенуации, тем самым подтверждено соответствие генотипа реассортантного вируса фенотипическим свойствам. Результаты работы, наглядно представленные в виде таблиц и рисунков, свидетельствуют, что поставленные задачи были решены в полном объеме, а выводы работы обоснованы. Достоверность выводов определяется тщательным планированием экспериментов, выбором методик, использование компьютерных программ, грамотной обработкой и критическим анализом полученных результатов. Материал изложен последовательно, логично и хорошо иллюстрирован. Рисунки и таблицы, представленные в работе, свидетельствуют о владении автором современными компьютерными программами. Следует отметить наличие и мелких недочётов, обычных для студенческих работ, и очевидно, связанных лишь с недостаточным опытом автора в написании подобного рода трудов. Работа содержит ряд грамматических и пунктуационных ошибок, не все рисунки имеют подробное описание, что затрудняет восприятие результатов. Все приведённые выше замечания не снижают общее положительное впечатление от работы. Результаты и выводы данной работы указывают на потенциальную эффективность и практическую значимость разработанного метода. Диссертационная работа на соискание ученой степени магистра, представленная Ландграф Г.О. по актуальности, объему выполненных исследований, методическому уровню, научной новизне и практической значимости отвечает требованиям, предъявляемым к выпускной квалификационной работе магистра, и заслуживает оценки «отлично», а соискатель Ландграф Г.О. - присвоения степени магистра. Рецензент: Заведующая лабораторией векторных вакцин ФГБУ «НИИ гриппа» Минздрава России, к.м.н. Марина Анатольевна Стукова